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UV1901PC紫外分光光度計(jì)法測(cè)定毛丁白頭翁中總苷類的含量

測(cè)定毛丁白頭翁植物的根及根莖中總苷類的含量。

毛丁白頭翁植物的根及根莖中總苷類簡(jiǎn)介

臨床上主要用于感冒發(fā)熱、咳嗽痰多、痢疾、小兒疳積,外用治跌打損傷、毒蛇咬傷…等。毛丁白頭翁的主要化學(xué)成分為總苷類,近年來對(duì)毛丁白頭翁提取物中總苷類的含量的測(cè)定報(bào)道甚少,此實(shí)驗(yàn)選用常用的回流提取法提取毛丁白頭翁藥材,選用熊果苷為對(duì)照品(熊果苷是毛丁白頭翁提取物中總苷類中的一個(gè)主要成分且在醫(yī)藥方面熊果苷有著極其重要和廣泛的應(yīng)用)用紫外分光光度法對(duì)毛丁白頭翁提取物中的總苷類含量進(jìn)測(cè)定，方法準(zhǔn)確,快速,重現(xiàn)性好,可作為毛丁白頭翁藥材中內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要依據(jù)。

實(shí)驗(yàn)方法:采用UV1901PC紫外分光光度計(jì),檢測(cè)波長(zhǎng)為286nm,線性范圍為16.0～37.0ug/ml,相關(guān)系數(shù)為0.9999,平均回收率為100.6%,RSD為2.313%(n=6)。

1 儀器與材料

儀器:UV1901型紫外可見分光光度計(jì)(上海奧析)。

電子天平。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

材料:毛丁白頭翁95%乙醇,乙酸乙酯,均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

精密稱取熊果苷對(duì)照品2.0mg,置10ml容量瓶中,用95%乙醇配制成O.2mg/ml的溶液,搖勻,以95%乙醇為空白,將待測(cè)液盛于比色皿中,置于比色池中,在200～800nm波長(zhǎng)段掃描。結(jié)果表明毛丁白頭翁提取物中總苷類在223nm和286nm處有zui大吸收峰,但由于在286nm波長(zhǎng)處的峰形較223nm波長(zhǎng)處的峰形完好且286nm處受到雜質(zhì)的干擾小,故選286nm作為毛丁白頭翁提取物中總苷類的測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取熊果苷對(duì)照品5.3mg,置10ml容量瓶中,用95%乙醇溶解并定容成0.53mg/ml,作為貯備液。精密吸取貯備液5ml,置50ml的容量瓶中,用95%乙醇溶解并定容成0.053mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液,精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液3,4,5,6,7ml,分別置于10ml容量瓶中,用95%乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,使?jié)舛确謩e為16.0,21.0,27.0,32.0,37.Oug/ml,用95%乙醇作空白,將待測(cè)液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長(zhǎng)286nm處測(cè)定吸收度,結(jié)果見下圖。

所測(cè)結(jié)果經(jīng)回歸得回歸方程:y=9.24827x-0.01474(r=0.9999)。結(jié)果表明:熊果苷對(duì)照品溶液

在16.0～37.0ug/ml濃度范圍內(nèi),濃度與吸收度線性關(guān)系良好。

2.3 精密度試驗(yàn)

精密吸取濃度為0.053mg/ml的熊果苷對(duì)照品溶液4ml置于10ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用95%乙醇作

空白,將待測(cè)液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長(zhǎng)286nm處測(cè)定吸收度,結(jié)果見表1。

表1 

UV1901PC紫外分光光度計(jì)精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果表明:儀器精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.4.1 樣品溶液的制備

精密稱取毛丁白頭翁粉末1.25g,加入40m195%乙醇,熱回流提取三次,每次1h.將得到的總提物合并后抽濾,然后減壓回收95%乙醇,將得到濃縮物用蒸餾水溶解,然后用乙酸乙酯萃取水液五次,棄去乙酸乙酯萃取液,將得到的水液移到蒸發(fā)皿中,在70℃水浴鍋上蒸干水分,殘?jiān)?/span>95%乙醇溶解并轉(zhuǎn)入25ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,作為測(cè)定總苷類的供試品溶液。2.4.2 樣品溶液和對(duì)照品溶液穩(wěn)定性的測(cè)試精密吸取濃度為0.053mg/ml的熊果苷對(duì)照品溶液10ml,毛丁白頭翁樣品液0.5ml分別置于25ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用95%乙醇作空白,將待測(cè)液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長(zhǎng)286nm處測(cè)定吸收度,時(shí)間間隔為30min.

UV1901PC紫外分光光度計(jì)法穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

  結(jié)果表明:對(duì)照品溶液和樣品溶液的穩(wěn)定性在4小時(shí)內(nèi)良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取毛丁白頭翁根和根莖的粉末6份,照樣品項(xiàng)下制得樣品液。從樣品液中精密吸取0.5ml置于25ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用95%乙醇作空白,將待測(cè)液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長(zhǎng)286nm處測(cè)定吸收度,按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算含量,結(jié)果見表3。

表3 

UV1901PC紫外分光光度計(jì)法重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

原藥材中總苷類百分含量(%)RSD(%)

2.1702.0522.1292.0512.0852.075

2.246

  結(jié)果表明:重現(xiàn)性較好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取毛丁白頭翁根和根莖粉末6份,照樣品項(xiàng)下制得樣品液。精密吸取0.5ml置于25mi

容量瓶中,精密加入熊果苷對(duì)照品液,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,于波長(zhǎng)286nm處測(cè)定吸收度,并計(jì)算回收率.

 紫外分光光度法熊果苷回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

樣品含熊果苷(mg)加入熊果苷(mg)實(shí)測(cè)量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)

2.7 樣品測(cè)定

精密吸取毛丁白頭翁樣品溶液0.5ml置于25ml容量瓶中,加95%乙醇稀釋至刻度,搖勻,用95%乙醇作空白,將待測(cè)液盛于比色皿中,置于比色池中,于波長(zhǎng)286nm處測(cè)定吸收度,按標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的回歸方程計(jì)算含量,結(jié)果見表5。表5 毛丁白頭翁總苷類的含量測(cè)定結(jié)果(紫外可見分光光度法)

UV1901PC紫外分光光度計(jì)測(cè)定毛丁白頭翁提取物中總苷類的含量在16.0～37.0ug/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)。毛丁白頭翁樣品液中總苷類的回收率為100.6%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好。

UV1901PC紫外分光光度計(jì)具有簡(jiǎn)便易行的特點(diǎn),用此法測(cè)定毛丁白頭翁植物中總苷類的含量并以此含量作為此藥材的質(zhì)量控制的一個(gè)方面有一定的實(shí)際意義。